شناسایی رتروویروس بیماری jaagsiekte گوسفند در بافت ریه فیکس شده در فرمالین و قالب گیری شده در پارافین بوسیله آزمایش pcr

چکیده آدنوماتوز ریه گوسفند(opa) که به عنوان بیماری جاگزیکت نیز شناخته شده است یک نئوپلازی واگیر ریه گوسفند است که به ندرت در بز هم دیده شده است. بیماری توسط یک نوع بتا رتروویروس به نام jsrv به وجود می آید که متعلق به خانواده ی رتروویریده، شاخه ی ارتورتروویرینه و جنس بتا رتروویروس ها می باشد. برای تشخیص بیماری آزمون هیستوپاتولوژی مورد استفاده قرار می گیرد که با سایر آزمون ها از جمله pcr، ایمونوهیستوشیمی و الایزا تکمیل می-شود. در برخی از موارد امکان آزمون pcr روی نمونه های تازه در هنگام مواجهه با ضایعات بیماری وجود ندارد و مجبور به نگهداری بافت ها در فرمالین یا قالب پارافینی تا زمان آزمون می شوند. فرمالدئید که ماده ی موثر فرمالین است باعث به وجود آمدن پیوند های متقابل بین نوکئیک اسید و پروتئین می شود. با وجود این، نمونه های بافتی فیکس شده در فرمالین و قالب گیری شده در فرمالین(ffpe) به وفور برای pcr بر روی محتوای dna آنها به خصوص در مورد قطعات کوچک dna در تشخیص بیماری ها مورد استفاده قرار می گیرد. در مطالعه ی اخیر تاثیر نگهداری بافت-های ریه در فرمالین و قالب پارافینه برای جداسازی قسمتی از ویروس jsrv به وسیله آزمونhnpcr مورد بررسی قرار گرفت. بر روی نمونه های ریه مشکوک به آدنوماتوز بعد از تشخیص هیستوپاتولوژی، آزمون hnpcr با پرایمرهای اختصاصی ژن gag ویروس jsrv صورت گرفت. دو روش غیر حرارتی و روغن های معدنی برای پارافین زدایی همراه با استخراج به روش فنل کلروفرم در زمان های مختلف، بررسی شدند. نتایج نشان داد که نگهداری بافت ها در قالب پارافینه تاثیر چندانی روی نتایج از 24 ساعت تا 6 ماه نداشت و و روش غیر حرارتی در تمام بازه های زمانی مورد بررسی به خصوص تا 7 ماه نتایج بهتری در آزمونhnpcr داشت. آنالیز فیلوژنتیک قسمتی از ژن gag جدا شده نیز تفاوت عملکردی با ژنوتایپ های پروتوتیپیک نشان نداد.